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蛋白質聚集——Nicomp 動態(tài)光散射系統(tǒng)

 更新時間:2024-12-12  點擊量:191

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全文共 932 字,閱讀大約需要 分鐘


摘要:

蛋白質溶液中的聚集被證明會產(chǎn)生有害影響。對較大的聚集體可以進行測量,但對 0.150 納米到 2 微米范圍內的較小聚集體則難以量化。Nicomp® 動態(tài)光散射(DLS)技術可以證明聚集的存在,但不能提供聚集體絕對濃度的任何信息。





正文內容

生物治療藥物已被證明容易誘發(fā)抗藥抗體(ADA)。有證據(jù)表明,蛋白質聚合體能夠增強免疫原性,從而增強對單體形式蛋白質的免疫反應。


生物治療蛋白質的制造商通常通過一系列步驟制備注射藥物,包括:

1.蛋白質合成和純化

2.冷凍干燥以在運輸過程中保持穩(wěn)定

3.注射前的復配


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凍干的好處是可以穩(wěn)定蛋白質以便運輸,但并不清楚凍干蛋白質在重組后是否會恢復到單聚態(tài)。如果在此過程中有少量蛋白質聚集,就有可能誘發(fā)病人對治療過程產(chǎn)生免疫反應。


如果能開發(fā)出一種簡單的方法,在復溶后以大小與濃度直方圖的形式測量聚集程度,就能在配制過程中對這些藥物進行篩選,以確保復溶過程能釋放單體而不產(chǎn)生大量聚集。


圖 1 顯示了對 200 納米處疫苗聚集體的分析。在大約 300 納米處可以清楚地看到聚集。三次運行清楚地顯示了 200 納米處物質的損失,同時 300 納米處的峰值也在增加。


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圖1.疫苗 300nm處聚集體




圖 2 顯示,在約 600 納米處也可見聚集。請注意,200 納米處的物質濃度是 600 納米處聚集濃度的十萬倍。


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 2.疫苗600nm處聚集體




圖 3 顯示了通過改變顯示比例而獲得的更精確的濃度測量結果。從圖中可以看出,疫苗 2 在 600 納米處的聚集物濃度是疫苗 1 的 5 倍。


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圖3.疫苗1與疫苗2的比較




有了這些信息,我們就可以確定這種疫苗制劑的最佳配制條件,以避免聚集并降低對疫苗產(chǎn)生意外免疫反應的風險。


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4.微米范圍內低水平的聚集體





最后一張圖顯示了另一組分析結果,表明某些蛋白質即使在 5 微米的范圍內也會出現(xiàn)低水平的聚集,而實際濃度相對于天然蛋白質來說可能非常低,以至于無法通過其他方法檢測到。